Q:产量低
A:
• 检查细胞生长情况,培养条件是否适合质粒增殖。尽可能选择高拷贝数的质粒。
• 如果质粒拷贝数低,可适当增加收集的菌液量,但是要保证菌体可以被完全裂解。
• 如果裂解液过于粘稠,应适当减少菌体量。
• 培养时间过长或在 2-8℃保存时间过长会明显降低产量,建议使用新鲜的菌液。
Q:质粒 DNA 中有基因组 DNA 污染
A:裂解时间不宜超过 5 分钟。
Q:影响下游酶切
A:洗涤液 WB 洗涤后应尽量离心去除残留的液体,待硅胶膜完全干燥后再加入洗脱缓冲液。
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